腦立體定位儀技術與大小鼠實驗具體操作方法

實驗原理   

        腦立體定位技術被廣泛的運用于腦的損毀、刺激和腦電記錄的精確定位中，成為研究腦結構和功能必不可少的工具。腦立體定位技術主要是使用腦立體定位儀作為定位儀器，利用某些顱骨外面的標志（如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢狀縫等）或其它參考點所規定的三度坐標系統，來確定皮層下某些神經結構的位置，以便在非直視暴露下對其進行定向的刺激、破壞、注射藥物、引導電位等研究，是神經解剖、神經生理、神經藥理和神經外科等領域內的重要研究方法。常用的實驗動物，如大鼠、小鼠、貓等高等哺乳動物以及鳥類，其均有完全的外耳道，可用（耳棒）來定位。在確定了顱外標記之后，就可按腦立體定位圖譜所提供的數據進行定位操作。實驗器材腦立體定位儀，MC-5微操作儀，常規手術器械，鉆孔針，紗布，干棉球，酒精，0.4%戊巴比妥鈉（麻醉劑，現配現用），生理鹽水，1ml注射器，3%雙氧水， 小白鼠。

實驗步驟

小鼠腦定位的系統大致分兩種：

（1） 用耳間線中心定位，首先將兩個耳棒尖端在定位儀滑道中間部位彼此相接觸（兩個耳棒讀數相同），旋緊鏍絲。然后取下一側耳棒，另一耳棒不動。調節移動推進器，使校驗電極尖端與耳棒尖端的中心點相觸，即為A點（即耳間線中心點），并記下刻度值。然后，將推進器水平移動到門齒鉤的上方，將門齒鉤平面與校驗電極尖端相觸。這時就定出外耳道中心點與門齒牙板上面上沿之間的水平切面0點，記為H0。這時，動物的前囟和后囟基本處在一個水平面上，相差0-0.1mm。另外，規定耳間線中心點以上為+，向下為-；向嘴側為+，向尾側為-。

（2）用顱骨標志定位（常用前囟），即以前囟為嘴尾側0點，由前囟向嘴側為+，向尾側為-，其它與上面定位方法相同。

 實驗內容 

（1）動物麻醉：小鼠，體重20-30g，稱重后以0.4%戊巴比妥鈉腹腔麻醉注射時必須緩慢，隨時注意動物狀態。

（2）小鼠頭部固定：將小鼠的門齒固定于腦定位儀上頜固定器，然后把一側的耳捧推入動物的外道后，使動物的頭在處于兩滑道正中。再將另一耳捧推入另一側的外耳道。這時觀察兩個耳棒的刻度一致后，將兩耳棒上的固定螺絲扭緊，在將牙齒固定器上壓鼻環 2 壓下后扭緊（鼻環、耳棒的松緊度調節適宜為好），這時從各個方向推壓動物頭部"均不會出現移動。

（3）開顱鉆孔前的備皮：剪去動物頭部毛，用2%碘酒及75%酒精棉球作頭部皮膚的消毒，沿矢狀縫作一3cm長的皮膚切口，分離皮下組織，用雙氧水清潔顱骨表面的筋膜及肌肉并剝離，推開骨膜，暴露前囟、人字縫及矢狀縫。

（4）確定標準中線：將金屬定位針向下移動到矢狀縫上方后，再前后移動定位針，使定位針定位到前囟。

（5）小鼠海馬定位：用定位針在前囟后2mm, 矢狀縫旁開2.5mm處定位一點，即為海馬的平面位置，然后在此點上用鉆孔針在顱骨上鉆一小圓孔。

（6）注射藥物：小鼠海馬則位于該圓孔下2 mm，將1ml注射器吸入藥物安置到MC-5微操作儀上，操作儀器使注射器針頭由小鼠腦鉆孔處下降2mm時完成藥物注射到小鼠腦海馬處。

（7）制作腦組織切片：將小鼠腦制作成切片，顯微觀察小鼠腦中紅染料位置來驗證小鼠腦海馬定位是否準確